体外克隆目的基因的方法
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1. 邻近片段靶基因的体外克隆：
2. (1) PanhandlePCR法：
3.在限制性内切酶的DNA3 '端添加与未知序列上游已知序列互补的单链引物，使变性后产生的单链DNA在分子内聚合，使已知DNA定位在未知相邻DNA的侧翼区域。引物设计是该技术应用的关键。所需引物包括一条与已知序列上游互补的单链引物和位于单链引物与已知序列两侧的两对引物。
4. (2) cassetpcr法：
5. 用Casette引物快速扩增cDNA和未知基因组DNA的有效方法。由于Cassette的5 '端没有磷酸基团，因此在目标DNA的3'端与Cassette的5 '端交界处形成间隙。在第一次PCR反应的第一个循环中，从引物C1开始的拉伸反应在连接位点终止，从而控制了非特异性扩增。只有从引物S1延伸合成的DNA链，它才能成为引物C1的模板进行DNA扩增反应。再用中间引物(引物C2、引物S2)进行第二次PCR反应，可以高效特异地扩增目标DNA。
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