免疫组织化学和激光共聚焦扫描显微镜将冷冻组织切片(10 m厚)置于明胶包被的载玻片上，培养15分钟。100甘氨酸和0.1%羧基牛血清白蛋白(Olion，瓦赫宁根大学，荷兰)型，PH 7.4。冷冻切片孵育过夜，抗体主要针对vimentin(克隆模式；Sigma，圣路易斯，钼，美国)在潮湿的房间。PBS染色后，用streptavidin-cy-2 (biotrend, Cologne, Germany)制备生物驴抗抗体。核染色用0.002%7-氨基放线菌素(分子探针，卡尔斯巴德，加州，美国)。缺失的一抗作为阴性对照。免疫标记切片用配备氩-氪和氦-氖激光器的tcnnt徕卡激光显微镜检查。系列共聚焦切片以0.5 m的间隔通过深层组织样本进行。为了提高图像质量，并从一系列的信号平均中获得每个图像的高信噪比。数据采集后，图像传输到Silicon Valley Graphics工作站打印或Octane (Silicon Valley Graphics, Sunnyvale, California, USA)，使用imaris，多通道图像处理软件(Flat, with u Rich, Switzerland)进行图像恢复和重建。该方法的原理和通过该技术获得的许多图像之前已经发表[46,47]。在标记实验中，冷冻切片用一抗多克隆抗体(anti-C-kit, Denmark, Denmark)孵育过夜，然后用驴抗兔抗体和接触片(dianova, Hamburg, Germany)孵育过夜。反复冲洗后，制备硫化铅，与直接偶联Cy - 3的抗vimentin抗体孵育。用烧焦的633共轭鬼笔环肽染色肌动蛋白。4,6 -二氨基-2-苯基吲哚(分子探针)核染色。所有的准备工作都安装在mowiol(赫斯特，法兰克福，德国)。如先前报道的[10]，经典免疫细胞化学已被用于进行福尔马林固定的活素-生物素过氧化物酶复合物石蜡切片。主要有：CD 34单克隆抗体，用于- 100,1,10 (biogenex克隆qbend, SAN Ramon, CA, USA)和vimentin单克隆，1:100，克隆v-9 (biogenex)。

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