鸡马立克氏病毒类型,鸡马立克氏病的病原
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病毒株不难从患病的鸡和许多看起来很正常的鸡中分离出来。用于分离病毒的优选样品是脾脏或周围血液的肿瘤细胞,肾细胞和白细胞。由于mdv在这些组织中高度细胞结合,因此必须将全细胞用作接种物。羽毛囊是病鸡中分离的完整病毒颗粒的唯一良好来源。对于怀疑含有mdv的样品,可以通过接种易感鸡,细胞培养物和鸡胚来分离病毒。
小鸡接种:这是分离mdv最敏感的方法。选择易感鸡并在1日龄或1周龄时通过腹膜内接种感染,然后严格分离并观察。接种18-21天后,用相应的阳性和阴性对照检查有或没有感染迹象的试验鸡。测试应持续至少10周。
细胞培养方法:虽然该方法的灵敏度不如鸡接种方法,但简单易行,仍具有实用价值。首先,制备鸭胚成纤维细胞或鸡肾细胞培养物,最合适的接种物是白细胞,肿瘤细胞或血液。典型的mdv斑块在5-14天内出现,而在对照培养物中未观察到这种变化,这是分离mdv的证据。该特征性斑块由圆形和梭形折射细胞和含有牛蒡型核内包涵体的多核细胞组成。
鸡胚接种方法:鸡胚通过卵黄囊或绒毛尿囊膜途径接种病毒,分别在接种后4-6天或10-11天在绒毛尿囊膜上产生痤疮样病变。
在实验室诊断中,通常使用琼脂凝胶免疫扩散测定进行md血清学测试以检测mdv抗原及其沉淀的抗体。还可以通过荧光抗体方法或酶抗体方法检测血清抗体,以检测患病鸡组织中的病毒抗原和肿瘤细胞上的肿瘤相关表面抗原(matsa)。使用已知的md阳性血清进行羽毛囊抗原的琼脂扩增试验非常简单。从要测试的鸡中取出一些含羽毛的羽毛,将含有髓的部分切成小的绿色瓶子并用玻璃棒适当地挤压以用于测试。这种方法非常敏感。在接种20天后,人工感染mdv的鸡的阳性率超过90%。通过使用已知的mdv抗原进行琼脂扩散测定来检测血清抗体的方法可用于诊断免疫发病率,并且还可用于流行病学研究。
病毒中和试验(vn)或噬斑减少试验可用于检测感染鸡血清的中和抗体。
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